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陈兴课题组揭示军团菌来源的新型O-糖基转移酶机理

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? ? ? ? 201918日,北京大学开元棋牌赌输了_开元棋牌黑不黑_下载开元棋牌要信任与分子工程学院、北大-清华生命科学联合中心陈兴教授课题组在Nature Chemical Biology杂志在线发表了题为Legionella effector SetA as a general O-glucosyltransferase for eukaryotic proteinsDOI: 10.1038/s41589-018-0189-y的研究论文报道通过开元棋牌赌输了_开元棋牌黑不黑_下载开元棋牌要信任酶法标记策略,实现了对嗜肺军团菌效应蛋白糖基转移酶SetA的蛋白底物鉴定,并阐明SetA底物选择机理为糖蛋白的人工合成提供了一种有力的工具

糖基化修饰是一种广泛存在且重要的蛋白质翻译后修饰由糖基转移酶催化形成抗体、疫苗许多临床治疗性蛋白质都具有特异性糖基化修饰蛋白活性至关重要基于糖基转移酶开元棋牌赌输了_开元棋牌黑不黑_下载开元棋牌要信任酶法合成方法是获得均一糖蛋白的有效手段之一。因此,找寻性质优良的各种糖基转移酶十分关键。对比真核细胞,细菌来源的糖基转移酶具有易表达纯化和催化产率高等优良性质,常被改造为人工合成糖蛋白的工具酶。然而,蛋白O-连接糖基化修饰在原核生物与真核生物之间并不保守,这成为了利用细菌糖基化系统生产真核生物O-糖蛋白的一大瓶颈。为了解决这个问题,陈兴教授课题组对病原菌-宿主相互作用中的蛋白质糖基化进行了探索。

? ? ?某些病原菌入侵宿主细胞后,会分泌具有糖基转移酶活性的效应蛋白。这些效应蛋白往往利用宿主的糖供体,并且修饰宿主的靶蛋白。因此,对这类糖基转移酶的工程化,可为实现真核生物O-糖蛋白的合成提供新的有效策略。嗜肺军团菌效应蛋白SetA具有O-葡萄糖转移酶活性,然而其底物蛋白尚未被鉴定。陈兴课题组首先开发了能够实现特异性标记选择性富集的开元棋牌赌输了_开元棋牌黑不黑_下载开元棋牌要信任酶法策略他们设计被SetA利用生物正交基团修饰的糖供体尿苷二磷酸-6-叠氮-葡萄糖,UDP-6AzGlc),将叠氮葡萄糖6AzGlc转移至底物蛋白。通过点击开元棋牌赌输了_开元棋牌黑不黑_下载开元棋牌要信任反应,与可切割生物素探针连接,实现对底物蛋白的选择性富集和位点特异性质谱鉴定(下图)质谱分析鉴定分布于276个蛋白的317O-glucose修饰位点天然糖供体标记及军团菌侵染实验,验证了SetA可以修饰众多的底物蛋白

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开元棋牌赌输了_开元棋牌黑不黑_下载开元棋牌要信任酶法标记策略流程示意图

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? ? ???进一步研究发现被修饰蛋白具有S/T#-X-L-P/G (#为修饰氨基酸)序列保守性核心催化结构域的结构模型表面糖供体结合口袋邻近处的疏水区域参与了SetA的底物选择随后,研究人员将SetA选择性识别的S/T-X-L-P/G保守性序列,开发为O-glucosylation 标签 (GlcTag)实现了真核生物蛋白的位点特异性O-基化修饰(下图)

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?SetA识别S/T-X-L-P/G保守序列

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? ? ???综上所述,这项研究开发了开元棋牌赌输了_开元棋牌黑不黑_下载开元棋牌要信任酶法标记策略,实现了对军团菌效应蛋白糖基转移酶SetA的底物蛋白鉴定,揭示了SetA的底物修饰具有S/T-X-L-P/G序列选择首次发现了原核生物中广谱O-糖基化系统,为糖蛋白的人工合成提供了有力的工具。该开元棋牌赌输了_开元棋牌黑不黑_下载开元棋牌要信任酶法标记富集策略推广应用到多种糖基转移酶的底物蛋白鉴定,促进更多的糖合成工具酶的开发,进而实现各种蛋白精准合成。

? ? ? ?北大-清华生命科学联合中心博士研究生高玲为本论文第一作者。陈兴教授通讯联系作者。北大开元棋牌赌输了_开元棋牌黑不黑_下载开元棋牌要信任院来鲁华教授,北京生命科学研究所邵峰研究员北大生科院肖俊宇研究员参与该研究。该研究工作得到了国家自然科学基金委、科技部北大-清华生命科学联合中心的资助。

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相关链接: https://www.nature.com/articles/s41589-018-0189-y

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